2结果与讨论

2.1色谱条件优化

   麻痹性贝类毒素极性强，普通C18柱无法保留，实验中选用TSK–GelAminde–80色谱柱，该柱对麻痹性贝类毒素保留和分离效果最好。减小梯度变化的速度，增加平台期的时间，使具有相同质荷比的麻痹性贝类毒素GTX1，GTX4和dcGTX2，dcGTX3获得较好的分离效果，且线性良好，定性定量离子丰度比稳定，满足目标化合物定性定量要求。典型的色谱图见图1、图2。

2.2质谱条件优化

   亲水性贝类毒素的离子响应低，峰型差，200μg／mL的标准样品溶液其色谱峰响应仅有e5，这是由化合物性质决定的。为了最大限度提高色谱峰响应值，改善峰型，从以下几方面进行优化：

（1）选择合适的调谐液稀释剂，提高麻痹性贝类毒素的离子响应。分别选择水、乙腈、酸化乙腈作为稀释剂进行试验，结果显示，采用20%乙腈水溶液(含0.2%甲酸)作为稀释剂时待测物离子响应最高，有利于最优质谱条件的确定。

（2）考察方法基质效应时发现，贝类基质对10种麻痹性贝类毒素的测定均产生基质抑制效应，因此，样品前处理过程采用液液萃取和固相萃取结合去除基质中非极性杂质和大部分极性杂质，减少基质抑制，提高离子响应。

（3）尽量将10种贝类毒素基线分离，分段监测提高仪器检测灵敏度（见图1）。

（4）实验发现，10种麻痹性贝类毒素对正负离子监测的响应有区别，分别考察正负离子监测确定最优监测条件（见表4）。

2.3样品前处理条件优化及基质效应考察

  实验中发现不同贝类样品基质本底差别较大，部分种类样品基质在STX，dcSTX及neoSTX出峰位置有干扰，极易产生假阳性判断。因石墨化炭黑固相萃取柱对极性物质具有一定的吸附能力，选择以supelcoENVI–Carb固相萃取对提取液进行净化，分别对提取液性质和上样量进行考察。结果显示，向提取液中加入氨水，调节提取液至中性提取效果理想，回收率对比见图3。由于石墨化炭黑柱对PSTs的吸附能力有限，上样量以不超过400μL为宜，实验结果见图4。

2.4标准工作曲线与检出限

   在1.3仪器工作条件下，对表2中的系列混合标准工作溶液分别进样测定，以待测化合物的峰面积(Y)为纵坐标，以其质量浓度(X)为横坐标进行线性回归，得线性回归方程及相关系数。以3倍信噪比对应的浓度作为方法检出限。10种麻痹性贝类毒素的线性方程、相关系数和检出限列于表5。由表5可知，10种麻痹性贝类毒素的质量浓度在4～240μg／L与对应的色谱峰面积线性关系良好，相关系数大于0.99，检出限为8~28μg／kg。

 2.5加标回收与精密度试验

   准确称取6份混合均匀的阴性样品5.0g作为本底，加入适量麻痹性贝类毒素标准样品进行加标回收试验。按1.4方法进行样品处理，然后上机测定，结果列于表6。由表6可知，10种麻痹性贝类毒素的平均回收率为82.5%～115.1%，相对标准偏差为0.6%～7.5%(n=6)，说明方法的精密度和准确度良好。10种麻痹性贝类毒素混合标准溶液的总离子流图见图5。

2.6实际样品检测

   应用所建方法对市售23份贝类样品进行测定，结果显示，所有样品中均未检测到麻痹性贝类毒素。

3结语

   采用超高液相色谱–串联质谱法测定水产品中10种麻痹性贝类毒素，用甲酸溶液对样品进行加热提取，应用石墨化炭黑固相萃取柱对其亲水基质进行净化。相比于其它方法，该方法对极难去除的亲水杂质进行针对性处理，通过考察提取液性质、提取温度、净化液性质和有效上样量，优化了提取净化条件，取得了理想的净化效果，提高了方法检测灵敏度和精确度。