2结果与讨论

2.1重均相对分子质量测定

2.1.1色谱柱的确定

   在临床上硅油应用黏度越大越不易乳化，但黏度太大不利于手术操作，硅油的重均相对分子质量同其黏度成正比。眼用硅油主要应用黏度范围为1000～5500mPa.s，重均相对分子质量为30～50KD，因此选择安捷伦PLgel5μm103A型凝胶柱。

2.1.2样品浓度、流动相的选择

   根据硅油的理化性质，选择以甲苯为流动相。硅油浓度过高会导致样品溶解不均匀，色谱峰顶出现毛刺现象；硅油浓度过低导致信号弱，经过条件优化试验选择供试液含硅油的量为15mg／mL，进样体积为20μL。经过优化色谱峰形，选择流量为0.5mL／min。

   用凝胶渗透色谱–多角度激光光散射法平行测定同一个样品6次，重均相对分子质量(M_w)及相对分子质量分布系数M_w／M_n见表1，散射及示差信号图谱见图2。由表1可知，M_w的平均值为31KD，相对标准偏差为4.4%；M_w／M_n的平均值为2.9，相对标准偏差为4.6%。表明所建方法测量精密度良好。

2.2D4，D5定性分析

   用丙酮溶解一定量样品制得样品溶液，同时用丙酮分别配制质量浓度约为20μg／mL的D4，D5标准溶液。分别用气相色谱–质谱联用仪分析样品溶液和标准溶液。在总离子流图上，样品溶液中主要杂质峰与D4，D5标准溶液色谱峰的保留时间一致，对样品溶液中主要杂质峰质谱图扣除背景进行谱库检索，与D4，D5检索相似度不低于90%，由此证实眼用硅油中含有D4，D5。经条件优化，D4，D5色谱峰的保留时间分别为8.33，10.99min，见图3，D4，D5的特征离子图分别见图4、图5。

2.3D4，D5定量分析

   为了提高D4，D5检测灵敏度，采用选择离子(SIM)定量，经过图谱条件优化，确定了1.3.2实验条件。

2.3.1校准曲线及检出限

   用丙酮分别配制D4的质量浓度分别为0.978，4.9，9.8，19.6，49.1μg／mL的系列标准工作溶液；D5的质量浓度分别为2.0，5.0，10.0，20.0，60.0μg／mL的系列标准工作溶液，分别测定。以质量浓度（x)与相对应的峰面积(y)进行线性回归，D4的质量浓度在1～50μg／mL范围内与色谱峰面积呈良好的线性，线性方程为y=8.13×103x+252.6，相关系数(r2)为0.999。D5的质量浓度在2～60μg／mL范围内与色谱峰面积线性良好，线性方程为y=3.78×10³x–173.8，相关系数(r²)为0.998。

   以3倍信噪比计算，D4，D5的检出限分别为0.10μg／mL，0.23μg／mL。

2.3.2精密度试验

   分别制备质量浓度为20g／mL的D4，D5标准溶液，用所建方法分别测定6次，结果见表2。由表2可知，D4，D5测定结果的相对偏差分别为2.5%，3.3%(n=6)，表明所建方法测量精密度良好。

2.3.3加标回收试验

   向同一处理好的样品中分别加入3种不同浓度的D4，D5标准溶液，分别测定并计算加标回收率，结果见表3。由表3可知，D4，D5的加标回收率分别为90.7%～96.7%，87.3%～94.1%，表明所建方法测量准确度较高。

3结语

   建立凝胶渗透色谱–多角度激光光散射法对硅油进行相对分子质量分析，用气相色谱–质谱法定性定量检测眼用硅油中寡聚硅氧烷类物质D4，D5的含量，该法干扰少，简便可行，系统性能和回收率均良好。可用于硅油质量控制，同时可为硅油中其它寡聚硅氧烷类物质定性定量分析奠定基础。